El virus del dengue pertenece a la familia Flaviviridae, presenta 4 serotipos y se transmite a través de la picadura de un mosquito, el Aedes aegypti. Para su diagnóstico se recomienda la realización de pruebas diagnósticas a toda persona que presente signos y síntomas de enfermedad y que viva en un área de transmisión del virus o que haya viajado a dicha área.
El laboratorio de Vacunar cuenta con varios tipos de pruebas diagnósticas para dengue las cuales mencionamos a continuación:
1.- Pruebas moleculares
2.- Detección de Antígenos del virus (NS1)
3.- Pruebas serológicas
4.- Otras pruebas
1.- Pruebas moleculares
Estas consisten en la detección del genoma viral por PCR, y puede detectarse sólo durante la fase de viremia, la cual comienza antes de la aparición de los primeros signos y síntomas alcanzando su máxima expresión con el inicio de los mismos. Por lo tanto sólo tiene valor durante los primeros 3 a 5 días después del inicio de la sintomatología.
2.- Detección de Antígenos del virus (NS1)
En este ensayo se busca la presencia del antígeno NS1, que es una proteína no estructural del virus. Dicha proteína es detectable durante la fase aguda de la infección, no se recomienda su uso una vez pasados los 7 días desde la aparición de los síntomas.
3.- Pruebas serológicas
Consiste en la detección de los anticuerpos neutralizantes específicos para el virus del dengue, dentro de estos podemos determinar los anticuerpos IgG y/o los IgM.
Anticuerpos IgM
A medida que el sistema inmunitario combate la infección, los anticuerpos IgM aumentan, generalmente pueden detectarse luego de 4 a 5 días del comienzo de los síntomas y continúan hasta 12 semanas después del comienzo de los síntomas o la exposición, aunque puede extenderse su detección en el tiempo.
Anticuerpos IgG
En una infección primaria, los anticuerpos IgG aparecen pocos días después de la positivización de las IgM y generalmente perduran por muchos años, sino toda la vida, mientras que en una infección secundaria los anticuerpos IgG se disparan a títulos altos rápidamente.
La utilidad de este ensayo está relacionada con la demostración de una seroconversión positiva, es decir cuando el paciente, en muestras pareadas con una diferencia de 10-15 días, pasa de “no reactivo” a “reactivo” o la diferencia de títulos entre la primera y la segunda muestra es igual o mayor a dos diluciones dobles.
Perfiles esquemáticos de viremia de dengue, NS1,IgM, IgG antidengue durante la infección primaria y secundaria por dengue a lo largo del tiempo:
Pang, Junxiong Vincent & Chia, Po Ying & Lye, David & Leo, Yee. (2017). Progress and Challenges Towards Point-of-Care Diagnostic Development for Dengue. Journal of Clinical Microbiology. 55. JCM.00707-17. 10.1128/JCM.00707-17
4.- Otras pruebas
Entre otras está disponible la prueba de neutralización por reducción de placas, que es un ensayo biológico basado en el principio de interacción de los virus y los anticuerpos y resulta en la inactivación de los virus de manera que ya no puedan infectar ni reproducirse en un cultivo celular.
También existen tests que a través de inmunocromatografía detectan NS1, IgM e IgG, pero su uso se recomienda para fortalecer la respuesta diagnóstica en áreas de circulación comprobada del virus.
A modo de síntesis se puede ver en el siguiente cuadro un resumen de lo expuesto hasta aquí.
Vacunación
La aprobación por parte del ANMAT de la utilización de la vacuna para el dengue “Qdenga” plantea un nuevo desafío para el diagnóstico de laboratorio en pacientes que recibieron la vacuna.
Qdenga es una vacuna a virus vivo atenuado y confiere protección contra infecciones causadas por los 4 serotipos del virus del dengue.
En el estudio clínico DEN-205 (TAKEDA) se observó una viremia transitoria postvacunal en el 49% de los participantes del estudio que no habían sido infectados por dengue antes, y dicha viremia comenzó en la segunda semana después de la primera inyección, con una duración media de 4 días; esto se confirmó mediante RT-PCR para dengue cuantitativa y validada para detectar serotipos específicos.
El antígeno NS1 no fue detectado en ningún estudio tras la vacunación, con la prueba utilizada en los mismos.
Además se estudió la generación de anticuerpos a los 30 días de la primera dosis los anticuerpos IgG e IgM y el perfil fue similar en los vacunados a los generados por una infección.
Conclusiones
En los métodos moleculares utilizados para la detección y serotipificación de dengue, se utilizan sondas y primers para identificación de casos positivos.
Ante la aplicación de la vacuna para dengue, habría que pensar en una estrategia de secuenciación genómica que permita diferenciar las cepas provenientes de la vacuna, de las cepas provenientes de una infección.
La no detección del antígeno NS1 tras la vacunación podría ser el punto de partida para lograr diferenciar vacunados de infectados pero solo en los primeros días desde el inicio de los síntomas.
Con respecto a los anticuerpos es importante conocer el esquema y fecha de vacunación a la hora de observar las pruebas serológicas, ya que no se puede diferenciar una respuesta inmune causada por la vacunación de una causada por una infección natural. La utilización de determinación de anticuerpos IgG e IgM presentaría limitaciones como herramienta de diagnóstico en pacientes previamente vacunados.
BIBLIOGRAFÍA
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https://www1.hospitalitaliano.org.ar/multimedia/archivos/cursos_attachs/4991.pdf
Pang, Junxiong Vincent & Chia, Po Ying & Lye, David & Leo, Yee. (2017). Progress and Challenges Towards Point-of-Care Diagnostic Development for Dengue. Journal of Clinical Microbiology. 55. JCM.00707-17. 10.1128/JCM.00707-17.
https://www.nature.com/articles/s41541-023-00670-6
https://www.argentina.gob.ar/sites/default/files/conain-09-11-23-vacuna-contra-dengue-posicion-grupo-de-trabajo.pdf